医学检验技术
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  • 分子生物学技术
  • 一、名词解释( 本大题共11题,每题4分,共44分。)

    1. 基因

    2. 基因表达

    3. 基因表达调控

    4. 顺式作用元件

    5. 反式作用因子

    6. 启动子

    7. 终止子

    8. 操纵子

    9. 增强子

    10. 隔离子

    11. 沉默子

    12. 细胞信号转导

    13. 第一信使

    14. 第二信使

    15. 受体

    16. 基因组

    17. 基因组学

    18. 人类基因组计划

    19. 人类基因组多态性

    20. cDNA文库

    21. 基因组文库

    22. 必需基因

    23. 断裂基因

    24. 重复序列

    25. 限制性片段长度多态性

    26. 后基因组学

    27. 转录组学

    28. 蛋白质组学

    29. 代谢组学

    30. 糖组学

    31. 免疫组学

    32. PCR

    33. RT-PCR

    34. 巢式PCR

    35. 多重PCR

    36. 原位PCR

    37. 定量PCR

    38. 分子杂交

    39. 印迹技术

    40. 原位杂交

    41. 生物芯片

    42. 基因芯片

    43. 蛋白质芯片

    44. 蛋白质免疫共沉淀

    45. 酵母双杂交技术

    46. 反义寡核苷酸技术

    47. RNA干扰

    48. 干扰小RNA

    49. 转基因技术

    50. 基因靶向技术

    51. 分子克隆

    52. 基因工程

    53. DNA重组技术

    54. 限制性核酸内切酶

    55. 粘性末端

    56. 平末端

    57. 克隆

    58. 克隆载体

    59. 表达载体

    60. 多克隆位点

    61. 质粒

    62. 转导

    63. 转化

    64. 感受态细胞

    65. 基因治疗

    66. 基因诊断

       

      二、简答题( 本大题共7题,每题8分,共56分。)

    67. 比较原核细胞与真核细胞的组织结构及其基因表达调控的异同。

    68. 在乳糖培养介质中大肠杆菌乳糖操纵子如何进行调节?

    69. 细胞间和细胞内通讯的信号分子有哪些?细胞分泌化学信号的作用方式有哪些?

    70. 简述G蛋白偶联型受体介导的信号通路。

    71. 简述细胞内Ca2+信号调控的机制。

    72. 简述核受体的结构与功能。

    73. 请简述人类基因组的基本概貌。

    74. 简述人类基因组计划的研究内容和任务。

    75. 请描述人类基因组计划的意义。

    76. 简述基因组学的研究内容。

    77. 何谓蛋白质组学?其研究内容包括哪些?

    78. 简述描述PCR技术的基本原理。

    79. PCR反应的体系有哪些必需成分组成?

    80. 请描述实时定量PCR技术的基本原理。

    81. 简述印迹技术的基本原理。

    82. 分子杂交与印迹技术有何应用?

    83. 请描述基因芯片技术的应用前景。

    84. 基因芯片技术在医学领域有哪些应用?

    85. 请描述RNA干扰的机制。

    86. 请描述RNA干扰技术的应用。

    87. 什么是基因工程?有哪些应用?

    88. 简述分子克隆中常用的工具酶及其作用。

    89. 什么是限制性核酸内切酶?请描述Ⅱ类酶的作用模式。

    90. 何谓质粒?请描述其结构、功能特点。

    91. 作为克隆载体的质粒应具备哪些特点?

    92. 质粒载体应具备什么特征?其主要用途有哪些?

    93. 分子克隆技术包括哪些基本步骤?

    94. 分子克隆是目的基因的制备有哪些主要方法?

    95. 请问目的基因与载体构建成重组体的方法有哪些?

    96. 目的基因和载体连接的主要方法有哪些?

    97. 如何进行重组体的筛选和鉴定?

    98. 简述重组体有哪些筛选和鉴定的方法?

    99. 请说明蓝白斑筛选的原理。

    100. 请说明双抗生素筛选的原理。

    101. 基因病的主要分为哪几类?

    102. 简述基因诊断的概念和特点。

    103. 简述基因诊断的内容及基本策略。

    104. 请描述基因诊断的常用技术方法有哪些?

    105. 简述基因诊断的应用。

    106. 什么是基因治疗?分为哪几类?

    107. 简述基因治疗的总体策略。

    108. 简述基因治疗的总体策略有哪些?

       

      《分子生物学技术》题库(更新)

      进行基因连锁分析基因表达调控

      一、选择题

      1. 基因表达调控可以发生在(  )

      A. 转录起始   B. 转录后水平   C. 翻译起始   D. 翻译后水平   E. 以上均正确

    109. 基因表达调控的主要环节是(  )

    1. 基因复制   B. 转录起始   C. 转录后加工    D. 翻译起始   E. 翻译后加工

    1. 关于基因表达的描述,错误的是(  )

      A. 某些基因的表达产物为tRNA   B. 有些基因的表达产物为rRNA   C. 有些基因的表达产物是蛋白质分子   D. 基因表达具有组织特异性和阶段特异性   E. 基因表达都要经过基因转录和翻译的过程

      4. 在一个生物体的几乎所有细胞中均持续表达的基因称为(  )

      A. 假基因   B. 调节基因   C. 断裂基因   D. 管家基因   E. 可诱导基因

      5. 一些基因在受到外界因素刺激时会出现表达水平升高或降低,这类基因称为(  )

      A. 可诱导或可阻遏基因   B. 管家基因   C. 假基因   D. 断裂基因   E. 以上都不对基因

      6. 表达调控的意义是(  )

      A. 适应环境   B. 维持生长和增殖   C. 维持细胞分化   D. 控制个体发育   E.以上均正确

      7. 操纵子就其基因表达调节的水平来讲,属于(  )

      A. 复制水平的调节   B. 转录水平的调节   C. 转录后水平的调节   D. 翻译水平的调节   E. 翻译后水平的调节

    2. 一个操纵子通常含有(  )

      A. 一个启动序列和一个编码序列   B. 一个启动序列和数个编码序列   C. 数个启动序列和一个编码序列   D. 数个启动序列和数个编码序列   E. 以上均不对

      9. 乳糖操纵子的阻遏蛋白结合的部位是(  )

      A. I基因序列   B. P序列   C. O序列   D. CAP结合位点   E. 结构基因序列

      10.乳糖操纵子中调节基因I的编码产物是(  )

      A. 阻遏蛋白   B. 分解物基因激活蛋   C. β-半乳糖苷酶   D. 半乳糖苷乙酰转移酶   E. 透酶

      11.CAP指的是(  )

      A. 阻遏蛋白   B. 分解物基因活化蛋白   C. 血浆载脂蛋白

      D. 脂酰基载体蛋白   E. 以上均不对

      12.在下列哪种情况下,乳糖操纵子中结构基因的转录水平最高(  )

      A. 无乳糖且无葡萄糖时   B. 无乳糖但有葡萄糖时   C. 有乳糖且无葡萄糖时   D. 有乳糖且有葡萄糖时   E. 以上均不对

      13.关于乳糖操纵子的叙述,错误的是(  )

      A. 当没有乳糖时,调节基因表达生成阻遏蛋白,操纵子处于阻遏状态   B. 当有乳糖存在时,阻遏蛋白从启动序列上解离,操纵子处于诱导状态   C. 当没有葡萄糖时,CAP结合在启动序列附近,促进结构基因转录   D. 当有葡萄糖存在时,结合在启动序列附近的CAP减少,结构基因转录速率降低   E. IPTG是一种强的抑制剂

      14.下列关于转录因子的描述,正确的是(  )

      A. 转录因子是参与基因转录调控的蛋白质   B. 通过DNA-蛋白质或蛋白质-蛋白质相互作用而发挥作用   C. 转录因子含有DNA结合结构域和转录激活结构域   D. 不同的转录因子之间也可以相互结合   E. 以上均正确

      15.转录因子含有的典型结构域包括(  )

      A. DNA结合域   B. 转录激活域   C. 二聚化结构域   D. 以上均正确   E. 以上均不对

      16.反式作用因子是指(  )

      A. 具有激活功能的调节蛋白   B. 具有抑制功能的调节蛋白   C. 对自身基因具有调节功能的调节蛋白   D. 对另一基因具有调节功能的调节蛋白   E. 以上均不对

      17.真核基因处于活化状态时对DNaseI的敏感性表现为(  )

      A. 高度敏感   B. 中度敏感   C. 低度敏感   D. 不敏感   E. 不一定

      18.真核基因组的结构特点是(  )

      A. 真核基因组结构庞大   B. 基因转录产物为单顺反子   C. 真核基因大多具有不连续性   D. 含有大量的重复序列   E. 以上都正确

      19.直接识别并结合真核基因TATA盒的是(  )

      A. TFⅡA   B. TFⅡB   C. TFⅡD   D. TFⅡF   E. TFⅡH

      20.活性染色质的特点有(  )

    1. A. 对核酸酶敏感   B. 发生DNA拓扑结构变化   C. 核小体中组蛋白发生修饰   D. DNA中的碱基发生甲基化修饰   E. 以上均正确

      21.下列关于基因启动子的叙述,正确的一项是(  )

      A. 起始密码子附近的mRNA序列   B. 翻译起始位点附近的mRNA序列   C. 转录起始位点附近能够与RNA聚合酶结合并调节转录的一段DNA模板序列   D. 远离结构基因且能增强或减弱基因转录的一段DNA模板序列   E. 内含子序列

      22.原核生物RNA聚合酶中,哪一个亚基主要负责转录起始?(  )

      A. α亚基   B. β亚基   C. β'亚基   D. σ亚基   E. ω亚基

      23.关于外显子的叙述错误的是(  )

      A. 外显子序列中含有大量的稀有碱基   B. 外显子是真核生物断裂基因中的片段   C. 外显子被转录   D. 成熟的mRNA中含有与外显子对应的序列   E. hnRNA中含有与外显子对应的序列

      24.关于内含子的叙述错误的是(  )

      A. 内含子序列在加工修饰过程中被除去   B. 内含子是真核生物断裂基因中的片段   C. 内含子被转录   D. 成熟的mRNA中不含有与内含子对应的序列   E. hnRNA中不含有与内含子对应的序列

      25.转录延长时,RNA聚合酶全酶组分中的σ亚基(  )

      A. 作为终止因子在转录终止时起作用   B. 随全酶在模板上滑动前移   C. 转录起始完成后从全酶中脱落   D. 合成转录所需的引物   E. 以上均不对

      26.原核生物转录过程中,ρ因子的主要作用是(  )

      A. 参加转录的起始过程   B. 参加转录的延长过程   C. 参加转录的终止过程   D. 负责合成转录所需的底物   E. 以上均不对

      27.真核基因转录因子TF ITFⅡTFⅢ的命名依据是(  )

      A. 按照其发现的先后顺序   B. 转录因子包含的亚基种类   C. 按照其其包含的亚基数量   D. 根据其和真核生物三种RNA聚合酶的对应关系   E. 以上均不对

      28.TATATATA box(  )

      A. 能和RNA聚合酶结合   B. 真核生物基因的转录起始位点   C. 真核生物基因的翻译起始位点   D. 真核生物基因启动子区域中常见的保守序列   E. 原核生物基因启动子区域中常见的保守序列

      29.真核生物的转录起始阶段,需要形成转录前起始复合物(PIC),它是(  )

      A. RNA聚合酶与转录产物RNA形成的复合物   B. 仅由RNA聚合酶和DNA模板形成的复合物   C. 多种转录因子与RNA聚合酶和DNA模板形成的复合物   D. 多种转录因子与RNA聚合酶和转录产物RNA形成的复合物   E. 以上均不对

      30.关于Pribnow盒(Pribnow box),叙述正确的是(  )

      A. 其保守序列为TATAAT   B. 原核生物的RNA聚合酶能与其结合   C. 是原核生物基因转录起始位点上游的一段高度保守性序列   D. 是原核生物基因启动子区域中的一段高度保守性序列   E. 以上叙述均正确

      二、问答题

    1. 什么是基因?什么是基因表达?基因表达的多级调控包括哪些环节的调控?

      基因(gene)是指合成有功能的蛋白质或RNA所必需的全部DNA序列,包括编码蛋白质或RNA的核酸序列及为保证转录所必需的调控序列。

      基因表达是指基因经过转录、翻译,产生具有特异生物学功能的生物分子(RNA和蛋白质)的过程。产物包括:蛋白质和多肽,转录体(mRNA,tRNA,rRNA等)。

      基因表达的多级调控包括转录前调控、转录调控、转录后调控、翻译调控和翻译后调控。

    2. 比较原核生物与真核生物基因表达调控的异同。

      相同点:

    3. 目的一致,都是以使生物更好的适应外界环境和维持生长和增殖;

    4. 基因调控均具有多层次和复杂性;

    5. 转录起始是基因表达的主要和基本调控点。

      不同点:

    6. 原核生物基因表达的调控机制相对简单,真核生物基因的表达调节机制则更为复杂;

    7. 原核以负性调节为主,真核以正性调节为主,更精确、更经济;

    8. 原核具有一种RNA聚合酶,真核具有三种RNA聚合酶;

    9. 原核转录水平的调节为操纵子模型,真核转录起始的调节主要涉及顺式作用元件和转录因子之间以及不同转录因子之间的相互作用,另外染色质结构变化也在基因表达调控过程中起重要作用。

    10. 什么是顺式作用元件?请列举至少3种顺式作用元件并说明其功能。

      顺式作用元件(cis-acting element) 是指存在于基因旁侧调节(激活或阻遏)基因转录的DNA序列,分为正调控元件和负调控元件。真核生物正调控元件多见。

    11. 启动子:位于基因编码区上游并为RNA聚合酶(RNAP)识别、结合和启动转录的DNA序列。

    12. 终止子:基因编码区下游能促使RNAP识别并终止RNA合成的DNA序列。

    13. 增强子:又称远端增强子元件,是指能加强其上游或下游基因转录的DNA序列。

    14. 沉默子:与增强子作用相反,能抑制上游或下游基因转录的DNA序列。

    15. 隔离子:真核基因组内能限定独立转录活性结构域的DNA元件。

    16. 什么是反式作用因子?请说明反式作用因子的结构特征。

      反式作用因子(trans-acting factor)是指与顺式作用元件直接或间接相互作用,影响基因表达的蛋白质。反式作用因子具有以下结构特征:

    17. DNA结合域:反式作用因子与顺式作用元件之间的特异识别及结合通常是非共价结合,被识别的DNA结合位点通常呈对称、或不完全对称结构。常见的DNA结合域有螺旋-转角-螺旋、锌指结构、亮氨酸拉链和螺旋-突环-螺旋等模体。

    18. 蛋白质-蛋白质相互作用结构域:绝大多数调节蛋白质结合DNA前,需通过蛋白质-蛋白质相互作用,形成二聚体或多聚体。

    19. 转录激活域:与其他转录因子相互作用的结构成分。常见的转录激活结构域有富含谷氨酰胺结构域,富含脯氨酸结构域及酸性α螺旋结构域。

    20. 什么是启动子?原核生物启动子有何结构特征?

      启动子是指位于基因编码区上游并为RNA聚合酶(RNAP)识别、结合和启动转录的DNA序列。原核细胞启动子存在两个保守序列:

    21. TATA盒:位于转录起始点上游约-10位置。TATA盒和转录起始点是维持RNAP基础转录水平所需,有独立和协调转录的功能,称为核心启动子(core promoter)或基础启动子(basal promoter),是原核细胞启动子最保守和最典型的保守序列。

    22. 上游启动子元件(UPE/UAS):位于转录起始点上游约-35位置。有CAAT盒(GCCAAT)和CG盒(GGGGCGG)频繁出现。含多种反式因子结合位点。

    23. 以乳糖操纵子为例,简述原核基因转录调控的原理。

      原核基因的转录调控主要为操纵子模式。操纵子即原核生物基因表达的协调控制单位,包括有结构基因、启动序列、操纵序列等。常见如乳糖操纵子、色氨酸操纵子等。

      以乳糖操纵子为例:

    1. 其结构包括调节基因I、操纵序列O、启动序列P以及三个结构基因ZYA。其中调节基因I编码生成阻遏蛋白,后者与操纵序列结合;RNA聚合酶与启动序列结合;分解代谢物基因激活蛋白(CAP)也结合在操纵序列附近;结构基因ZYA分别编码三个与乳糖代谢有关的酶,即:β-半乳糖苷酶,透酶和乙酰基转移酶。这三个酶的基因即作为一个整体由同一个调控区调节,以实现基因的协调表达。

    2. 其调节机制主要有正性和负性两种模式:

      阻遏蛋白的负性调节:当没有乳糖时,调节基因表达生成阻遏蛋白,阻遏蛋白结合至操纵序列处,阻碍RNA聚合酶与启动序列结合,抑制结构基因的转录启动,此时操纵子处于阻遏状态;当有乳糖存在时,乳糖首先被转变为半乳糖,半乳糖则作为一种诱导剂与阻遏蛋白结合,诱发蛋白质构象改变,使阻遏蛋白从启动序列上解离下来,从而启动结构基因的转录,此时操纵子处于诱导状态。

      ②CAP的正性调节:当没有葡萄糖时,cAMP浓度升高,与CAP结合,CAP进而结合在启动序列附近,从而进一步促进结构基因的转录。当有葡萄糖存在时,cAMP浓度降低,结合在启动序列附近的CAP减少,结构基因转录速率降低。

      协调调节:实际情况下,上述两种调节方式是相辅相成、互相协调的。譬如:在无乳糖且有葡萄糖时,阻遏蛋白负性调节起作用,此时结构基因不被转录;在有乳糖且有葡萄糖时,阻遏蛋白负性调节不起作用,此时结构基因转录水平低;在有乳糖且无葡萄糖时,阻遏蛋白的抑制作用被解除,CAP正性调节被激活,此时结构基因的转录水平最高。

      细胞信号转导

      一、选择题  

    3. 通过胞内受体发挥作用的信息物质为(  )

      1. 乙酰胆碱  Bγ-氨基丁酸  C.胰岛素  D.甲状腺素  E.表皮生长因子  

      1. 绝大多数膜受体的化学本质为(  )

      1. 糖脂  B.磷脂  C.脂蛋白  D.糖蛋白  E.类固醇  

      1. 细胞内传递信息的第二信使是(  )

      1. 受体  B.载体  C.无机物  D.有机物  E.小分子物质

      1. 下列哪项不是受体与配体结合的特点(  )

      1. 高度专一性  B.高度亲和力  C.可饱和性  D.不可逆性  E.非共价键结合  

      1. 通过膜受体起调节作用的激素是(  )

      1. 性激素  B.糖皮质激素  C.甲状腺素  D.肾上腺素  E.活性维生素D3  

      1. 下列哪项是旁分泌信息物质的特点(  )  

      1. 维持时间长  B.作用距离短  C.效率低  D.不需要第二信使  E.以上均不是  

      1. 胞内受体的化学本质为(  )

      1. DNA结合蛋白  BG蛋白  C.糖蛋白  D.脂蛋白  E.糖脂  

      1. 下列哪种受体是催化型受体(  )  

      1. 胰岛素受体  B.生长激素受体  C.干扰素受体  D.甲状腺素受体  E.活性维生素D3受体  

      1. IP3与相应受体结合后,可使胞浆内哪种离子浓度升高(  )  

      1. K+  BNa+  CHCO3-  DCa2+  EMg2+  

      1. 在细胞内传递激素信息的小分子物质称为(  )  

      1. 递质  B.载体  C.第一信使  D.第二信使  E.第三信使  

      1. 影响离子通道开放的配体主要是(  )  

      1. 神经递质 B.类固醇激素  C.生长因子  D.无机离子  E.甲状腺素  

      1. cGMP能激活(  )  

      1. 磷脂酶C  B.蛋白激酶A C.蛋白激酶G  D.酪氨酸蛋白激酶  E.蛋白激酶C  

      1. cAMP能别构激活(  )  

      1. 磷脂酶A B.蛋白激酶A  C.蛋白激酶C  D.蛋白激酶G  E.酪氨酸蛋白激酶  

      1. 不属于细胞间信息物质的是(  )  

      1. 一氧化氮  B.葡萄糖  C.甘氨酸  D.前列腺素  E.乙酰胆碱  

      1. 激活的G蛋白直接影响(  )

      1. 蛋白激酶A  B.蛋白激酶C  C.蛋白激酶G  D.磷脂酶A  E.磷脂酶C

      1. G蛋白是指(  )

      1. 蛋白激酶A  B.鸟苷酸环化酶  C.蛋白激酶G  D.生长因子结合蛋白-2  E.鸟苷酸结合蛋白

      1. G蛋白包括(  )

      1. G蛋白的亚基  B.生长因子结合蛋白-2  C.蛋白激酶G DRas蛋白  ERaf蛋白  

      1. 有关细胞内信息物质的错误叙述是(  )

      1. 细胞内信息物质组成多样化  B.无机离子也可以是一种细胞内信息物质  C.细胞内信息物质绝大部分通过酶促级联反应传递信号  D.信号转导蛋白分子多为原癌基因产物  E.细胞内受体是激素作用的第二信使

      1. 在信息传递过程中,产生第二信使的激素是(  )

      1. 糖皮质激素  B.雌二醇  C5β-羟基睾酮  D.醛固酮  E.促肾上腺皮质激素

      1. 在信息传递过程中不产生第二信使的物质是(  )

      1. 肾上腺素  B.胰高血糖素  C.甲状腺素  D.促肾上腺皮质激素  E.促性腺激素  

      1. G蛋白偶联的受体是(  )

      1. 环状受体  B.七次跨膜受体  C.催化性受体  D.细胞核内受体  E.细胞浆内受体  

      1. PKA所磷酸化的氨基酸主要是(  )

      1. 酪氨酸  B.甘氨酸  C.酪氨酸/甘氨酸  D.甘氨酸/丝氨酸  E.丝氨酸/苏氨酸

      1. 肾上腺素与膜受体结合,激活G蛋白后能(  )

      1. 激活鸟苷酸环化酶  B.抑制鸟苷酸环化酶  C.激活腺苷酸环化酶  D.抑制腺苷酸环化酶  E.激活磷脂酶C  

      1. 容易发生磷酸化与去磷酸化的氨基酸是(  )

      1. Gly,Ser,Val BThr,Ser,Tyr  CAla,Ile,Leu  DPhe,Thr,Val  ETyr,Val,Gly  

        二、问答题

        1. 细胞间和细胞内通讯的信号分子有哪些?细胞分泌化学信号的作用方式有哪些?  

        1)细胞间信号分子是由细胞分泌的调节靶细胞生命活动的化学物质的统称,又称作第一信使。种类:

      1. 蛋白质和肽类(如生长因子、细胞因子、胰岛素等)

      2. 氨基酸及其衍生物(如甘氨酸、甲状腺素、肾上腺素等)

      3. 类固醇激素(如糖皮质激素、性激素等)

      4. 脂酸衍生物(如前列腺素)

      5. 气体(如一氧化氮、一氧化碳等)

        2)胞内通讯的信号分子是指第一信使物质经转导刺激细胞内产生的传递细胞调控信号的化学物质。也称第二信使。种类:

      6. 无机离子:如 Ca2+

      7. 脂类衍生物:如二酰甘油(DAG

      8. 核苷酸:如环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP

      9. 糖类衍生物:如三磷酸肌醇(IP3

      10. 信号蛋白分子:Ras蛋白

      11. 细胞分泌化学信号的作用方式:

      12. 内分泌

      13. 旁分泌

      14. 自分泌

      15. 突触传递

      16. 简述G蛋白偶联型受体介导的信号通路。

        1)受体-G蛋白-AC(腺苷酸环化酶)途径:信号分子与细胞表面受体结合,通过Gs介导,激活AC,催化产生第二信使cAMP(环腺苷酸)。cAMP激活依赖cAMP的蛋白激酶(PKA),从而将靶蛋白中的丝氨酸或苏氨酸残基磷酸化,将其激活或钝化。这些被磷酸化共价修饰的靶蛋白往往是一些关键调节酶或重要功能蛋白,因而可以介导胞外信号,调节细胞反应。

        2)受体-G蛋白-PLC(磷脂酶C)途径:信号分子与细胞表面受体结合,通过Gq介导,激活磷脂酶Cβ(PLCβ),催化PIP2水解生成第二信使IP3(三磷酸肌醇)和DAG(二酰甘油)。IP3通过胞内钙的动员而启动Ca2+信号系统DAG能够激活蛋白激酶CPKC),将靶磷酸化,将其激活或钝化从而调节细胞反应。

      17. 简述细胞内Ca2+信号调控的机制。

      18. 钙离子的分布特点:细胞外液游离钙离子浓度高(1.12~1.23mmol/L);细胞内液的钙离子含量很低,且90%以上储存于细胞内钙库(内质网和线粒体内);胞液中游离Ca2+的含量极少(基础浓度只有0.01~0.1umol/L)。

      19. 胞内Ca2+信号的产生:1)细胞质膜钙通道开放,引起钙内流;2)细胞内钙库膜上的钙通道开放,引起钙释放。

      20. 胞内Ca2+信号的消失:胞液Ca2+可以再经由细胞质膜及钙库膜上的钙泵(Ca2+-ATP酶)返回细胞外或胞内钙库,以消耗能量的方式维持细胞质内的低钙状态。

      21. 钙调蛋白(CaM)是钙结合蛋白,与Ca2+结合后可激活CaM依赖性激酶(CaM-K),再磷酸化多种功能蛋白质的丝、苏氨基酸残基从而调节细胞反应

      22. 简述核受体的结构与功能。  

      23. 核受体(nuclear receptor是指位于胞浆或核内,与配体结合后启动信号转导并影响基因转录的细胞内受体。属配体依赖的转录调节因子。按结构与功能可将其分为:类固醇激素受体家族:糖、盐皮质激素、性激素受体等。甲状腺素受体家族:甲状腺素、维生素D和维甲酸受体等。

      24. 核受体组成:约800个氨基酸残基,含有2个锌指结构C端氨基酸长度相似,保守性强N端氨基酸长度不同,保守性差

      25. 共同结构:C端为激素结合区N端为受体调节区中部为DNA结合区

        核受体对基因表达调控的特点1)类固醇激素受体未结合配体前主要存在于核内,但有的存在于胞浆中。(2)类固醇激素受体本身就是转录因子,形成活性激素-受体复合物。

        基因组学和后基因组学

        一、选择题

      26. DNA重组体的构建是指(  )

        A. 对目的DNA片段作选择性扩增和表达的检测   B. 选择目的基因和表达载体 C. 将目的基因和载体在体外重组 D. 用一定方法转移目的基因到宿主细胞   E. 从细胞中提取DNA,在体外切割所需要的DNA片段

      27. 第一、二、三代DNA遗传标记分别是(  )  

        A. RFLPESTSNP   B. ESTSTSSNP   C. ESTSTRSNP   D. RFLPSTRSNP   E. VNTRSTSSNP

      28. 对一个克隆的DNA片段进行物理图谱分析,需要(  )

        A.限制性核酸内切酶     B.核酸外切酶    C.RNA酶     D.DNA连接酶   E.核酶

      29. 定性分析DNA的常用方法是(  )

        A. Southern blotting  B. Northern blotting    C. Western blotting   D. Dot blotting   E. 免疫组化

      30. RNAi技术的基本程序主要为(  )

        A. siRNA对目标RNA的干扰、确定干扰靶点、合成siRNA  B. 确定干扰靶点、合成siRNAsiRNA对目标RNA的干扰C. siRNA对目标RNA的干扰、合成siRNA、确定干扰靶点  D. 确定干扰靶点、siRNA对目标RNA的干扰、合成siRNAE. 以上都不对  

      31. 目前使用最广的将外源基因注入动物受精卵的方法是(  

        A. 精子载体法  B. 显微注射法   C. 胚胎干细胞法  D. 逆转录病毒载体法   E.脂质体包裹法

      32. 不能鉴定转基因动物体内是否整合及表达外源基因的方法是(    

        A. Southern blotting   B. Northern blotting   C. Western blotting   D. RT-PCR    E.核型分析

      33. 下列哪项不属于基因定位的方法(  

        A. 体细胞杂交法  B. 原位杂交   C. FISH   D. 连锁分析   E.酵母双杂交法

      34. 下列可用于DNA的定量与定性分析的方法是(  )

        A. Genomic PCR   B. Northern blotting   C. RNA酶保护实验   D. RT-PCR     E.免疫印迹

      35. 构建基因组文库时需要(  

        A.限制性核酸内切酶   B.核酸外切酶  C.RNA聚合酶   D.DNA酶    E. RNA酶    

      36. 构建打靶载体一般需要通过几次DNA体外重组过程(  )

        A.1    B.3     C.5     D.6   E. 7

      37. 某种组织来源的cDNA文库包含该种生物的(  )

        A.某些蛋白质的编码序列   B.所有蛋白质的结构基因         C.所有蛋白质的结构基因    

        D.某些蛋白质的结构基因          E.某些蛋白质的结构基因和转录调控序列

      38. 下列关于cDNA文库的叙述中,错误的是(  )

        A. 从特定组织或细胞中提取DNA        B. 从特定组织或细胞中提取RNA

        C. 由反转录酶催化合成与mRNA互补的单链DNA   D. 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA E. 双链DNA与合适载体连接后转入受体菌

      39. 关于cDNA的最正确的叙述是(  )      

          1. 生物单倍体所具有的全部基因称与mRNA互补的单链DNA   B. mRNA互补的双链DNA   C. mRNA为模板合成的双链DNA  D. 以单链DNA为模板合成的双链DNA   E. mRNA互补的单链RNA

            15.一种生物单倍体所具有的全部基因称为(  )

            A. 信息库 B. 基因库 C. 基因组   D. 基因频率 E. 基因型频率

            16.先进行基因定位作图,确定疾病基因在染色体上的位置,然后克隆该基因的方法属于(  )

            A. 分子克隆   B. 表型克隆   C. 功能克隆    D. 定位克隆    E. 电子克隆

            17.根据疾病基因所编码蛋白质的信息来克隆致病基因的方法属于(  )

            A. 分子克隆   B. 表型克隆   C. 功能克隆    D. 定位克隆    E. 电子克隆

            18.利用疾病与表型相对应的原理克隆致病基因的方法属于(  )

            A. 分子克隆   B. 表型克隆   C. 功能克隆    D. 定位克隆    E. 电子克隆

            二、问答题

          1. 什么是分子标记?有哪些分子标记?各有什么特点?

            是指以DNA片段为标记,通过DNA片段的电泳使DNA产生多态性。

            1)限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphisms,RFLP

            特点:

          2. 处于染色体上的位置固定。

          3. 同一亲本及其子代相同位点上的多态性片段特征不变。

          4. 同一凝胶电泳可显示同一位点不同的多态性片段,具有共显性特点。

          5. 有两种等位形式。

            2)简单序列长度多态性(simple sequence length polymorphisms,SSLP

            具有多等位性。又可分为可变串联重复(variable number of tandem repeat,VNTR

            特点:多态信息含量较高,但数量有限,而且在基因组上分布不均匀,不适合PCR扩增。

            简单串联重复序列(single sequence repeat,SSR

            特点:

          6. 染色体上的位置相对固定;

          7. 操作简单,可以用PCR扩增;

          8. 同一凝胶电泳可显示不同多态性片段,表现为共显性;4) 有多种等位形式。

            3)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP

            特点:

          9. 理论上同一碱基位置SNP等位形式最多为4,但多数为2.

          10. 直接从STS 测序中可寻找到SNP.

          11. 数量极大,

          12. SNP与人类易感性疾病有关, 涉及药物基因组学.

          13. 编码区SNP主要分布在密码子的第3个碱基位置.

            2. 什么是基因组物理图? 物理图与遗传图有何不同?有了遗传图为什么还要绘制物理图?

            直接检测DNA标记在染色体上的实际位置。

            前者是描述的基因相对位置,后者是具体的碱基位置

            因为遗传图存在以下缺点:

          14. 遗传学图谱分辨率有限。

          15. 遗传学图的覆盖面较低。

          16. 遗传图分子标记的排列会出现偏差。

            3. 鸟枪法测序与作图法测序有何差别?

            鸟枪法测序把基因组全部打散成短序列,测序后通过程序寻找互相覆盖的部分进行连接得到整个的序列结果。

            适合小,简单,重复序列少的基因组,测序速度快,并且无须提供相关的遗传图谱和物理图谱,效率高。

            作图法先将DNA分解成长序列,然后把长序列通过mapping定位到染色体上某段位置,再把长序列打散成短序列进行测序,适合大分子DNA克隆,测序时间长,依赖遗传图谱和物理图谱,效率低。

          17. 什么是CpG? CpG岛有什么分布特点? CpG岛是如何产生的?

            CpG:基因组中富含双碱基CpG的序列。

            特点:

          18. 主要在脊椎动物中发现,其它种属基因组中也有CpG, 但特征不明显.

          19. 绝大多数CpG岛中很少出现胞嘧啶甲基化, 因此被认为是基因转录活跃区.

          20. CpG岛主要分布在基因的启动子区和第一个外显子区.

          21. 绝大多数管家基因含有CpG, 是寻找基因的一个指标.

          22. 在染色体上分布很不均匀,但与基因的分布频率一致。

            产生原因:

          23. 由于细胞内胞嘧啶甲基化与脱氨基事件常常发生, 导致复制时的C→A错配.在下一轮复制时原来的胞嘧啶(C)位置由胸腺嘧啶(T)取代, 即发生碱基代换. 因此基因组DNA顺序进化的总趋势是A/T比例增加.

          24. 管家基因对生物的存活极其重要, 启动子区是基因调控的主要成分, 因此很少发生可遗传的C→A的突变, 保留了较平均值更高的G/C.

            常见分子生物学技术

            一、选择题

            1.确切地讲,cDNA文库包含(  )

            A. 一个物种的全部基因信息   B. 一个物种的全部mRNA信息   C. 一个生物体组织或细胞的全部基因信息 D. 一个生物体组织或细胞的全部RNA信息   E. 一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息

            2.在分子生物学领域,重组DNA技术又称(  )

            A. 酶工程   B. 蛋白质工程   C. 细胞工程   D. 基因工程   E. DNA工程

            3.在分子生物学领域,分子克隆主要是指(  )

            A. DNA的大量复制   B. DNA的大量转录   C. DNA的大量剪切   D. RNA的大量反转录   E. RNA的大量剪切

            4.在重组DNA技术中,能特异切割DNA的酶是(  )

            A. 限制性核酸内切酶   B. 核酸外切酶   C. 核酶   D. DNA酶   E. DNA连接酶

            5.重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是(  )

            A. DNA聚合酶   B. RNA聚合酶   C. DNA连接酶   D. RNA连接酶   E.限制性核酸内切酶

            6.在已知序列信息的情况下,目的基因获取的最方便的方法是(  )

            A. 化学合成法   B. 基因组文库法   C. cDNA文库法   D. 聚合酶链式反应   E. 抑制性削减杂交法

            7.催化聚合酶链式反应的酶是(  )

            A. DNA连接酶   B. 反转录酶   C.末端转移酶    D. DNA聚合酶I    E. Taq DNA聚合酶

            8.核酸分子杂交试验不能用于(  )

            A. 单链DNA分子之间的杂交   B. 单链DNA分子与RNA之间的杂交   C. 抗原与抗体分子之间的杂交  D. 基因组DNAPCR产物之间的杂交   E. RNARNA之间的杂交

            9.用作探针的DNA分子必须(  )

            A. 在杂交前变性   B. 在杂交前复性   C. 长于30个核苷酸    D. 短于30个核苷酸    E. 是双链分子

            10Southern blotting是(  )

            A. DNA转移到膜上所进行的杂交   B. RNA转移到膜上所进行的杂交   C. 将蛋白质转移到膜上所进行的杂交   D. 将多糖转移到膜上所进行的杂交   E. 将脂类转移到膜上所进行的杂交

            11.下列不属于DNA聚合酶的是(  )

            A. 端粒酶   B. Klenow片段   C. Taq DNA聚合酶   D. 反转录酶    E. DNA连接酶

            12.同位素标记探针检测硝酸纤维素膜(NC)上的DNA分子叫做(  )

            A. Southern blotting   B. Northern blotting   C. Western blotting   D. 免疫印迹   E. 蛋白质印迹

            13PCR的主要步骤不包括(  )

            A. 设计一对特异性引物   B. 95℃使模板DNA变性    C. 降温到合适的温度时使模板DNA与引物杂交  D. DNA聚合酶在dNTP存在时,进行延伸    E. 加热使DNA聚合酶失活

            14.关于蛋白质组研究的描述,哪个是正确的(  )

            A. 研究某一组织细胞中的一种蛋白质的功能   B. 研究某一组织细胞中的重要蛋白质的功能   C. 研究某一组织细胞中的全部蛋白质的功能   D. 研究某一组织细胞中的一类蛋白质的功能   E. 研究某一组织细胞中的一个蛋白质超家族的功能

            15.转基因动物是指(  )

            A. 把某基因转入动物某组织细胞   B. 把某基因从一个动物转移到另一动物   C. 把致病基因从动物细胞内转走  D. 把某基因转入动物的受精卵中   E. 把某基因整合入动物的受精卵中,再导入子宫,从而发育成新个体

            16.当要了解某一基因在某组织细胞中的mRNA表达水平时,采用哪种方法最合适(  )

            A. Southern blotting   B. Northern blotting   C. Western blotting   D. 免疫组化分析   E. Dot blotting  

            17DNA序列自动化测定中不正确的描述是(  )

            A. 荧光标记代替同位素标记   B. 激光扫描分析代替人工读序   C. 测序原理与手工测序基本相同   D. 不需要引物   E. 需要模板

            18.用于测序的DNA末端终止法中不需要(  )

            A. 四种脱氧核苷酸(dNTPB. 四种双脱氧核苷酸(ddNTPC. DNA聚合酶 D. 32P标记的一种dNTP  E. DNA连接酶

            19.基因克隆所需DNA载体的最基本性质是(  )

            A. 青霉素抗性  B. 卡那霉素抗性   C. 自我复制能力   D. 自我转录能力   E. 自我表达能力

            20.关于基因操作中目的基因的描述,错误的是(  )  

            A. 研究的目标基因   B. 需要研究其功能的基因   C. 需要克隆的基因   D. 需要表达的基因   E. 有重要功能的基因

            21cDNA文库的建立需要(  )

            A. 逆转录酶、DNA模板   B. 依赖DNADNA聚合酶、mRNA模板   C. 逆转录酶、mRNA模板   D. 依赖RNADNA聚合酶、tRNA模板   E. 逆转录酶、rRNA模板

            22.限制性核酸内切酶(  )

            A. 识别并切割RNA的特异序列   B. 识别并切割DNA的特异序列   C. 限制并保护自身的DNA D. 具有统一的识别和切割位点   E. 以上都不对

            23DNA克隆过程不包括以下步骤(  )

            A. 获取目的基因     B. 选择与修饰载体    C. 筛选转化子   D. 获得重组DNA分子   E. 合成探针检测基因

            24.目前常用于基因表达的宿主细胞包括(  )

            A. E.Coli   B. 哺乳动物细胞   C. 昆虫细胞   D. 酵母细胞   E. 以上都对

            25DNA分子的体外连接方法包括(  )

            A. 合成接头   B. Klenow补平   C. 粘端连接   D. 平端连接   E. 以上都对

            26M13噬菌体适用于(  )

            A. 构建基因组文库   B. 构建cDNA文库   C. 克隆较大的DNA片段  

            D. 克隆单链外源DNA片段进行序列分析   E. 以上都对

            27.质粒DNA导入细菌的过程称为(  )

            A. 转化   B. 转染   C. 感染   D. 传染   E. 连接

            28.限制性核酸内切酶是一种(  )

            A. DNA酶   B. RNA酶   C.存在于细菌中的酶   D.识别并切割特异DNA序列的酶   E. 切割产生特定大小片段的酶

            29.通常所说的“DNA克隆方法是(  )

            A. DNA合成仪合成DNA   B. DNA“插入载体   C. PCR扩增DNA   D. 从细胞提取DNA   E. 以上都不是

            30.所谓克隆就是指(  )

            A. 遗传学上相同的一群细胞  B.一群相同的DNA分子   C. “多莉绵羊   D. 人的复制品   E. 同一拷贝的集合

            二、问答题

          25. 简述印迹技术的分类及应用。

            答: 印记技术是指将在凝胶中分离的生物大分子转移或直接放在固定化介质上并加以检测分析的技术。它主要包括 DNA 印迹技术 (Southern blot) RNA 印迹技术 (Northern blot) 和蛋白质印迹技术 (Western blot) 等。

            1DNA 印迹技术主要用于基因组 DNA 的定性和定量分析,例如对基因组中特异基因的定位及检测等,此外亦可用于分析重组质粒和噬菌体。

            2RNA 印迹技术主要用于检测某一组织或细胞中已知的特异 mRNA 的表达水平,也可以比较不同组织和细胞中的同一基因的表达情况。

            3)蛋白质印迹技术,也叫免疫印迹,用于检测样品中特异性蛋白质的存在、细胞中特异蛋白质的半定量分析以及蛋白质分子的相互作用研究等。

          26. 简述 PCR 技术的基本原理及应用。

            答: PCR 技术类似于 DNA 的体内复制。以 DNA 分子为模板,以一对与模板序列互补的寡核苷酸片段为引物,在 DNA 聚合酶作用下,利用 4 种脱氧核苷酸,完成新的 DNA 的合成,重复这一过程使目的 DNA 片段得到扩增。这一技术可以将微量目的 DNA 片段扩增 100 万倍以上。基本步骤是首先待扩增 DNA 模板加热变性解链,随之将反应混合物冷却至某一温度,这一温度可使引物与它的靶序列发生退火,再将温度升高使退火引物在 DNA 聚合酶作用下得以延伸。这种变性 - 复性 - 延伸的过程就是一个 PCR 循环, PCR 就是在合适条件下的这种循环的不断重复。主要用于目的基因的克隆、基因的体外突变、 DNA RNA 的的微量分析、 DNA 序列测定和基因突变分析等。

          27. PCR的反应条件?

            答:(1PCR反应的缓冲液:Tris-HCl缓冲液,KCl 促进引物的退火,浓度太高时会抑制Taq DNA聚合酶活性。加入BSA或明胶有利于保护TaqDNA聚合酶活性。必要时加入适量二甲基亚砜(DMSO)或甲酰胺利于破坏模板二级结构,提高PCR反应特异性。

            2)镁离子浓度:一般用量1.5-2.0 mmol/LTaq DNA聚合酶活性需要Mg 2+Mg 2+浓度过低,会显著降低酶活性。Mg 2+浓度过高又使酶催化非特异性扩增增强。Mg 2+浓度还会影响引物的退火、模板与PCR产物的解链温度,从而影响扩增片段的产率。    

            3)底物浓度:工作浓度20-200umol/LdNTPs浓度过高可加快反应速度,也增加碱基的错配率和实验成本。降低浓度会导致反应速度下降,可提高反应的特异性。在PCR反应中,4dNTP必须以等摩尔浓度配制,以减少PCR反应的错配误差并提高使用效率。

            4Taq DNA聚合酶:75-80℃时具有最高的聚合酶活性,150个核苷酸/秒;具有良好的热稳定性,95℃仍有活性,应用浓度一般为1-2.5u/100ul反应体积。

            5)引物:0.1-0.5umol/L。引物浓度偏高会引起错配或非特异性扩增、生成引物二聚体,使目的DNA片段产率下降。退火温度与引物Tm值有关,引物Tm值在55-80℃范围较为理想。

            6)反应温度和循环次数:94℃ 3060sec55℃3060sec72℃3060sec,循环30次,最后72℃延伸5min

          28. 简述逆转录 PCR 、原位 PCR 和实时 PCR 技术的基本原理和主要区别。

            答:逆转录 PCR 是将 RNA 的逆转录和 PCR 反应联合应用的一种技术。即首先以 RNA 为模板,在逆转录酶的作用下合成 cDNA ,再以后者为模板通过 PCR 反应来扩增目的基因。

            原位PCR是在固定液固定、石蜡包埋的组织切片或细胞涂片上的单个细胞内进行的PCR反应,然后用特异性探针进行原位杂交,即可检出待测DNARNA是否在该组织或细胞中存在。

            实时 PCR 的基本原理是引入了荧光标记分子,并使荧光信号强度与 PCR 产物量成正比,对每一反应时刻的荧光信号进行实时分析,计算出 PCR 产物量。根据动态变化数据,可以精确计算出样品中最初的含量差异。

            逆转录 PCR 与传统 PCR 相比,将 RNA 的逆转录和 PCR 反应联合起来,可以对已知序列的 RNA 进行定性及半定量分析。常规 PCR RT-PCR 技术的产物不能在组织细胞中定位原位,因而不能与特定的组织细胞特征表型相联系,原位 PCR 技术可以将目的基因的扩增与定位相结合。实时 PCR 技术与传统 PCR 反应相比,在常规正向和反向引物之间,增加了一特殊引物作为探针。该技术可以通过动态监测反应过程中的产物量,消除了产物堆积对定量分析的干扰。

          29. Sanger法测序的原理。

            就是利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在GATC处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPsddNTPs的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

            6. 简述基因探针的种类和优缺点?

          30. cDNA探针:通过逆转录获得cDNA后,将其克隆于适当的克隆载体,通过扩增重组质粒而使cDNA得到大量的扩增。提取质粒后分离纯化作为探针使用。它是目前应用最为广泛的一种探针。

          31. 基因组探针:从基因组文库里筛选得到一个特定的基因或基因片段的克隆后,大量扩增、纯化,切取插入片段,分离纯化为探针。

          32. 寡核苷酸探针:根据已知的核酸顺序,采用DNA合成仪合成一定长度的寡核苷酸片段作为探针。

          33. RNA探针:采用基因克隆和体外转录的方法可以得到RNA或反义RNA作为探针。

            7. 阐明RNA干扰的机制。

          1. 病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA

          2. 宿主细胞胞质中的核酸内切酶DicerdsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA(大约21~23 bp),即siRNA

          3. siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链,继之由反义siRNA再与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物(RISC)

          4. RISC与外源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合,RISC具有核酸酶的功能,在结合部位切割mRNA,切割位点即是与siRNA反义链互补结合的两端。

          5. 被切割后的断裂mRNA随即降解,从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。

          6. siRNA不仅能引导RISC切割同源单链mRNA,而且可作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶(RdRP)作用下合成更多新的dsRNA,新合成的dsRNA再由Dicer切割产生大量的次级siRNA,从而使RNAi的作用进一步放大,最终将靶mRNA完全降解。

          7. 请设计一个实验,利用 PCR 方法鉴定重组表达质粒是否含有特定的多肽基因。

            答:实验步骤如下:

            (1) 利用国际基因文库等信息资源,获得这一多肽的基因序列

            (2) 根据多肽的基因序列,设计 PCR 引物

            (3) 提取转化菌中的重组表达质粒和空载质粒

            (4)PCR 扩增

            (5)PCR 扩增产物的鉴定

            基因工程

            一、选择题

          8. 下面有关限制酶的叙述哪个是不正确的?(  )

            A. 限制酶是外切酶而不是内切酶   B. 限制酶在特异序列(识别位点)DNA进行切割   C. 同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的   D. 一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端   E. 一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端

            2. 限制性核酸内切酶切割DNA后产生(  )

            A. 5'磷酸基和3'羟基基团的末端   B. 5'磷酸基和3'磷酸基团的末端   C. 5'羟基和3'羟基基团的末端   D. 3'磷酸基和5'羟基基团的末端   E. 以上都不是

            3. 可识别并切割特异DNA序列的酶是(  )

            A. 非限制性核酸外切酶   B. 限制性核酸内切酶   C. 限制性核酸外切酶   D. 非限制性核酸内切酶   E. DNA

            4. 克隆所依赖的DNA载体的最基本性质是(  )

            A. 卡那霉素抗性   B. 青霉素抗性   C. 自我复制能力   D. 自我表达能力   E. 自我转录能力

            5. 下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大?(  )

            A. 质粒   B. 黏粒   C. 酵母人工染色体(YAC)   D. l噬菌体   E. cDNA表达载体

            6.关于cDNA最正确的说法是(  )

            A. mRNA互补的单链DNA   B. mRNA互补的双链DNA   C. mRNA为模板合成的双链DNA   D. mRNA为模板合成的单链DNA   E. 以上都正确

            7. 在利用lacZ失活的显色反应筛选法中,IPTG的作用是(  )

            A. 诱导宿主的α肽的合成   B. 诱导宿主的ω肽的合成   C. 作为酶的作用底物   D. 作为显色反应的指示剂   E. 以上都不对

              8. 在基因工程中,DNA重组体是指(  )

              A. 不同来源的两段DNA单链的复性   B. 目的基因与载体的连接物   C. 不同来源的DNA分子的连接物   D. 原核DNA与真核DNA的连接物   E. 两个不同的结构基因形成的连接物

              9. 重组DNA的筛选与鉴定不包括哪一方法(  )

              A. 限制酶酶切图谱鉴定   B. PCR扩增鉴定   C. 显微注射   D. 蓝白筛选   E. 抗药筛选

              10.下面关于多克隆位点(multiple clone site, MCS)的描述,不正确的句是(  )

              A. 仅位于质粒载体中   B. 具有多种酶的识别序列   C. 不同酶的识别序列可以有重叠   D. 一般是人工合成后添加到载体中   E. 以上都正确

              11.下列对逆转录酶描述正确的是(  )

              A. 依赖于RNADNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶   B. 依赖于cDNADNA聚合酶或称为cDNA指导的DNA聚合酶   C. 依赖于DNADNA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶   D. 依赖于RNARNA聚合酶或称为rNA指导的RNA聚合酶   E. 以上都正确

              12.T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起,其底物的关键基团是(  )

              A. 2'-OH5'-P   B. 2'-OH3'-P   C. 3'-OH2'-P   D. 3'-OH5'-P   E. 5'-OH3'-P

              13.下列哪一种酶作用时需要引物?(  )

              A. 限制酶   B. 末端转移酶   C. 反转录酶   D. DNA连接酶   E. RNA聚合酶

              14.用下列方法进行重组体的筛选,说明外源基因进行了表达的是(  )

              A. Southem印迹杂交   B. Northem印迹杂交   C. Western印迹   D. 原位菌落杂交   E. 斑点杂交

              15.Klenow酶与DNA聚合酶相比,前者丧失了哪种酶的活性(  )

              A. 5'-3'合成酶   B. 3'-5'外切酶   C. 5'-3'外切酶   D. 内切酶   E. 转移酶

              16.黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体,以下说法错误的是(  )

              A. 它具有COS位点,因而可进行体外包装   B. 它具有质粒DNA的复制特性   C. 进入受体细胞后,可引起裂解反应   D. 进入受体细胞后,可引起溶源化反应   E. 具有MCS

              17.Clark做了一个有趣的实验,发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板,在双链DNA

              末端加一个碱基,主要是加(  )

              A. dGTP   B.dATP    C. dCTP   D. dTTP   E. 以上都可以

              18.cDNA文库包括该种生物的(  )

              A. 某些蛋白质的结构基因   B. 所有蛋白质的结构基因   C. 所有结构基因   D. 内含子和调控区   E. 某些RNA基因

              19.下列关于建立cDNA文库的叙述中,哪一项是错误的?(  )

              A. 从特定组织或细胞中提取DNA   B. 从特定组织或细胞中提取RNA   C. 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA   D. 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA   E. 新合成的双链DNA甲基化

              20.下面关于用T4多核苷酸激酶标记5' 端制备探针的描述中不正确的是(  )

              A. 可以标记DNA   B. 可以标记RNA   C. 只能标记突出的5' 端不能标记其他类型末端   D. DNARNA必须有5'-OH的存在   E. 既能标记双链DNA又能标记单链DNA

              21.关于报告基因,以下说法不正确的是(  )

              A. 以其易于分析的编码序列代替感兴趣基因的编码序列   B. 以其易于分析的启动子区代替感兴趣基因的启动子区   C. 能用于检测启动子的活性   D. 能用于确定启动子何时何处有活性   E. 可以判断目的基因的表达情况  

              22.限制性核酸内切酶是由细菌产生的,其生理意义是(  )

              A. 修复自身的遗传缺陷   B. 促进自身的基因重组   C. 强化自身的核酸代谢   D. 提高自身的防御能力   E. 以上都是

              23.基因工程操作常用的酶是(I 内切酶II 连接酶III 末端转移酶IV聚合酶(  )

              A. I + II   B. I +II + III   C. I +II + IV   D. I + III + IV   E. II + III + IV

              24.下列五个 DNA 片段中含有回文结构的是(  )

              A. GAAACTGCTTTGAC   B. GAAACTGGAAACTG   C. GAAACTGGTCAAAG   D. GAAACTGCAGTTTC   E. GAAACTGGTCAGAC

              25.某一重组 DNA  的载体部分有两个 BamHI 酶切位点。用 BamHI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子,其长度总和与已知数据吻合,该重组分子插入片段上的 BamHI 酶切位点共有(  )

              A. 1   B. 2   C. 3   D. 4   E. 不确定

              26.基因工程操作的三大基本元件是(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体)(  )

              A. I + II + III   B. I + III + IV   C. II + III + IV   D. II + IV + V   E. III + IV + V

              27.载体的功能是(I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力)(  )

              A. I   B. I + II   C. I + III   D. II + III   E. I + II + III

              28.考斯质粒(cosmid)是一种(  )

              A. 天然质粒载体   B. -DNA cos 区与一质粒重组而成的载体   C. 能裂解受体细胞的烈性载体   D. 具有溶原性质的载体   E. 能在受体细胞内复制并包装的载体

              29.下列有关基因的描述,错误的是(  )

              A. 蛋白质是基因表达唯一的产物   B. 基因是DNA链上具有编码功能的片段   C. 基因产物也可以是RNA   D. 基因突变不一定导致其表达产物改变结构   E. 一个基因可以表达几个产物

              30.cDNA 法获得目的基因的优点是(  )

              A. 成功率高   B. 不含内含子   C. 操作简便   D. 表达产物可以分泌   E. 能纠正密码子的偏爱性

              二、问答题

              1. 简述分子克隆中常用的工具酶及其作用。

              1. 限制性核酸内切酶:识别和切割双链DNA分子内特定的碱基顺序。

              2. DNA聚合酶:催化单核苷酸链延伸。包括klenow酶、Taq酶、逆转录酶、末端脱氧核糖核酸转移酶等。

              3. DNA连接酶:将两段DNA分子拼接起来。

              4. 碱性磷酸酶:催化去除DNARNA等的5¢-磷酸基团。

              5. T4多核苷酸激酶:使DNARNA等的5¢端磷酸化。

              6. 核酸酶S1:可水解双链DNARNADNA-RNA杂交分子中的单链部分。

              7. 什么是克隆载体?作为克隆载体的质粒应具备哪些特点?  

                克隆载体是指能和目的DNA连接形成重组DNA分子并导入到受体细胞,在受体细胞中能够复制、扩增并产生足够量目的DNA的载体。

                作为克隆载体的质粒应具备以下特征:

              8. 能自我复制并具较高的拷贝数。

              9. 分子量一般< 10kb

              10. 带有遗传筛选标记。

              11. 有适当的限制酶酶切位点,便于外源DNA的插入和筛选。

              12. 粘性质粒由哪几部分组成?有什么特点?

              13. 粘性质粒的组成:

                1. 质粒复制的起始位点(ORI)

                2. 抗药基因。

                3. 用于插入目的基因的单一酶切位点。

                4. l噬菌体的cos位点。

                1. 粘性质粒的特点:

                2. 粘粒(粘性质粒)载体大小为46Kb,而插入外源基因长达4050kb

                3. 加入l噬菌体头部和尾部蛋白,可将粘粒包装成类似于l噬菌体的具感染能力的颗粒,容易进入大肠杆菌。

                4. 粘粒进入细菌后则完全失去噬菌体的功能,而表现质粒的特性。

                5. 什么是表达载体?请列举真核细胞表达载体的应具备的重要元件。

                  表达载体是指能将外源基因在受体细胞中有效转录和正确翻译的载体。应具备以下元件:

                6. 原核质粒序列:包括复制起始序列和抗药基因标记。

                7. 启动子:转录起始位点上游25~30bp有富含ATTATA框,TATA框的上游约100~200bp处为上游启动子元件。

                8. 增强子(enhancer):是一类显著提高基因转录效率的顺式作用元件。

                9. polyA信号(AAUAA)。

                10. 简述分子克隆技术的基本步骤并说明如何获取目的基因。

                11. 分子克隆技术的基本步骤:

                12. 目的基因的获取。

                13. 载体的选择。

                14. 目的基因和载体的连接。

                15. 重组DNA导入受体细胞。

                16. 重组体的筛选和鉴定。

                17. 获取目的基因的途径:

                18. 从基因文库中获取。

                19. 逆转录合成cDNA

                20. 人工合成DNA片段。

                21. 直接从染色体DNA中分离目的基因。

                22. 请说明重组体的筛选和鉴定的方法。

                1. 根据遗传标记表型特征进行筛选

                  1. 抗生素抗性标记筛选

                  2. b-半乳糖苷酶基因失活筛选

                  3. 营养标记筛选

                  1. 根据重组DNA的结构特征进行鉴定

                  1. 重组子大小鉴定

                  2. 酶切鉴定

                  3. PCR鉴定

                  4. 核酸杂交技术鉴定

                  5. DNA序列分析鉴定(金标准)

                  1. 请说明蓝白斑筛选的原理。  

                  2. 某些质粒载体如pUC载体除了带有Amp抗性基因外,还有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ¢基因,该基因含一段编码b-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸a-肽的DNA片段,IPTG可诱导此片段合成,此片段能与宿主细胞所编码的缺陷型b-半乳糖苷酶实现基因内a-互补,形成完整的b-半乳糖苷酶,从而催化指示剂底物X-gal 形成蓝色菌落。

                  3. lacZ¢基因含有MCS,当外源基因插入MCS时,lac a-肽基因阅读框架被破坏,细菌内将无b-半乳糖苷酶活性,结果重组克隆呈白色菌落。

                  4. 筛选时,在培养基在加入IPTGX-gal和氨苄青霉素,培养后会长出蓝色和白色的菌落。蓝色菌落含空载体,白色菌落才是重组克隆。

                  5. 请说明双抗生素筛选的原理。

                  6. 某些质粒载体如 pBR322中有AmpTet 抗性基因,在Tet 抗性基因中有MCS,外源DNA片段插入会导致其失活。

                  7. 含有外源DNA的重组载体导入宿主菌后,宿主菌在含四环素培养基的平皿上不能生长而在含氨苄青霉素培养基的平皿上能够生长。在含四环素和氨苄青霉素的平皿上都能够生长的细菌只含有空载体。

                  8. 筛选时,先在含氨苄青霉素培养基的平皿上培养,长出菌落后再影印接种到含四环素培养基的平皿上培养,在含四环素培养基的平皿上不能生长而在含氨苄青霉素培养基的平皿上能够生长的菌落才是重组克隆。

                    基因诊断和基因治疗

                    一、选择题

                    1.印迹技术可以分为(  )

                    ADNA 印迹   BRNA 印迹   C.蛋白质印迹   D.斑点印迹   E.以上都对

                    2PCR 实验延伸温度一般是(  )

                    A90℃   B72℃   C80℃   D95℃   E60℃

                    3Western blot 中的探针是(  )

                    ARNA   B.单链 DNA   CcDNA   D.抗体   E.双链 DNA

                    4Northern blotting Southern blotting 不同的是(  )

                    A.基本原理不同   B.无需进行限制性内切酶消化   C.探针必须是RNA

                    D.探针必须是DNA   E.靠毛细作用进行转移

                    5.可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是(  )

                    A.斑点印迹   B.原位杂交   CRNA 印迹   DDNA 芯片技术   EDNA 印迹

                    6.下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板(  )

                    ARNA   B.单链 DNA   CcDNA   D.蛋白质   E.双链 DNA

                    7RT-PCR 中不涉及的是(  )

                    A.探针   BcDNA   C.逆转录酶   DRNA   EdNTP

                    8.关于 PCR 的基本成分叙述错误的是(  )

                    A.特异性引物   B.耐热性DNA聚合酶   CdNTP  D.含有Zn2+的缓冲液   E.模板

                    9cDNA 文库构建不需要(  )

                    A.提取mRNA   B.限制性内切酶裂解mRNA   C.逆转录合成 cDNA

                    D.将cDNA克隆入质粒或噬菌体   E.重组载体转化宿主细胞

                    10.目前主要克隆的致病基因是(  )

                    A.糖尿病致病基因   B.恶性肿瘤致病基因   C.单基因致病基因

                    D.多基因致病基因   E.高血压致病基因

                    11.目前基因治疗中选用最多的基因载体是(  )

                    A.噬菌体   B.脂质体   C.逆转录病毒   D.腺病毒相关病毒   E.腺病毒

                    12.目前基因治疗多采用的方法是(  )

                    A.基因增补   B.基因置换   C.基因矫正   D.基因灭活   E.基因疫苗

                    13.不需要电泳、转膜等程序(  )

                    ASouthern blotting     BNorthern blotting     CWestern blotting            Ddot blotting       Ein situ hybridization

                    14.电泳前不需进行限制性内切酶消化(  )

                    ASouthern blotting     BNorthern blotting     CWestern blotting            Ddot blotting       Ein situ hybridization

                    15.靠电转移完成生物大分子的转移(  )

                    ASouthern blotting     BNorthern blotting     CWestern blotting            Ddot blotting       Ein situ hybridization

                    16.直接在组织切片或细胞涂片上进行杂交(  )

                    ASouthern blotting     BNorthern blotting     CWestern blotting            Ddot blotting       Ein situ hybridization

                    17.将目的基因扩增与定位相结合(  )

                    A.逆转录PCR    B.原位PCR    C.实时PCR    D.多重PCR    ERFLP

                    18.能动态检测反应过程中的产物量(  )

                    A.逆转录PCR    B.原位PCR    C.实时PCR    D.多重PCR    ERFLP

                    19.将 RNA 的逆转录和 PCR 反应联合应用的一项技术(  )

                    A.逆转录PCR    B.原位PCR    C.实时PCR    D.多重PCR    ERFLP

                    20 .在同一反应中采取多对引物(  )

                    A.逆转录PCR    B.原位PCR    C.实时PCR    D.多重PCR    ERFLP

                    21.目前基因治疗采用最多的方法是(  )

                    A.基因疫苗   B.基因矫正   C.基因置换   D.基因增补   E.基因失活

                    22 .将致病基因的异常碱基进行修正的基因治疗方法是(  )

                    A.基因疫苗   B.基因矫正   C.基因置换   D.基因增补   E.基因失活

                    23 .将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是(  )

                    A.基因疫苗   B.基因矫正   C.基因置换   D.基因增补   E.基因失活

                    24 .利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是(  )

                    A.基因疫苗   B.基因矫正   C.基因置换   D.基因增补   E.基因失活

                    二、问答题

                  9. 简述基因诊断的概念及特点。

                    答:基因诊断是指利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法,直接检测基因结构及其表达水平是否正常,从而对疾病作出诊断的方法。

                    基因诊断与其他诊断方法相比,基因诊断的方法特点是:

                    1 )针对性强,以基因作为检查材料和探察目标,属于 病因诊断

                    2 )特异性强,用分子杂交技术选用特定基因序列作为探针,故有很高的特异性。

                    3 )灵敏度高,所用技术具有放大效应,故诊断灵敏度高

                    4 )适用性强,诊断范围广。

                  10. 简述基因诊断的内容及基本策略。

                    基因诊断的内容:

                  11. 检测正常基因

                  12. 检测与致病有关的突变基因

                  13.  

                  14. 检测基因中酶切位点的改变

                  15. 检测基因转录产物mRNA

                    基因诊断的基本策略:

                  16. 检测已知的能产生某种特定功能蛋白的基因

                  17. 检测与某种遗传标志连锁的致病基因

                  18. 检测表型克隆基因

                  19. 基因诊断的常用技术方法有哪些?

                  20. 核酸分子杂交技术:斑点印迹杂交、Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、原位杂交、等位基因特异寡核苷酸探针杂交。

                  21. 限制性内切酶酶谱分析法

                  22. 限制性片段长度多态性(RFLP)分析:点多态性、序列多态性。

                  23. PCR技术:DNA PCRRT-PCRPCR-SSCP、多重PCR、原位PCR、实时定量PCR

                  24. DNA芯片:高通量快速筛查。

                  25. 基因测序:金标准。

                  26. 什么是基因治疗?目前基因治疗有哪些基本策略?

                    答:从广义上讲,是指将某种遗传物质转移到患者细胞内,使其在体内发挥作用,以达到治疗疾病目的的方法,均谓之基因治疗。

                    (1) 缺陷基因精确的原位修复 包括对致病基因的突变碱基进行矫正的基因矫正和用正常基因通过重组原位替换致病基因的基因置换。这两种方法是对缺陷基因精确的原位修复,不涉及基因组的任何改变,是最为理想的治疗方法,但技术上目前尚未突破。

                    (2) 基因增补 是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞,不去除异常基因,而通过目的基因的非定点整合,使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有的功能增强。目前基因治疗多采用此法。

                    (3) 基因失活 是指将特定的序列导入细胞后,在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达,已达到治疗疾病的目的。

                    (4) 基因疫苗 主要是指 DNA 疫苗,是第三代疫苗。其将编码外源性抗原的基因插入到真核表达质粒中,直接导入人体内,抗原基因在一定时间内持续表达,不断刺激机体免疫系统,达到治病或防病目的。

                    5. 简述基因治疗的基本程序。

                    答:基本程序如下:

                    (1) 治疗性基因选择 选择对疾病有治疗作用的特定目的基因。

                    (2) 基因载体的选择 有病毒载体和非病毒载体,常用的是病毒载体。

                    (3) 靶细胞的选择 基因治疗根据受体细胞种类的不同分为体细胞和生殖细胞的基因治疗,目前进行的基因治疗均是体细胞基因治疗和间接体内疗法。

                    (4) 基因转移 基因导入人体的方式:间接体内疗法,即在体外将外源基因导入靶细胞内,再将这种基因修饰过的细胞回输病人体内,使带有外源基因的细胞在体内表达相应产物,达到治疗的目的;直接体内疗法,将外源基因直接导入体内有关的器官组织,使其进入相应细胞进行表达。

                    6. 为单基因遗传病患者设计一套基因治疗方案。

                    答:

                    (1) 基因治疗方法:基因增补是指将目的基因导入病变细胞或其它细胞,不去除异常基因,而通过目的基因的非定点整合,使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有的功能增强。目前基因治疗多采用此法。

                    ( 2) 基因导入方式:间接体内疗法,即在体外将外源基因导入体细胞内,再将这种基因修饰过的细胞回输病人体内,使带有外源基因的细胞在体内表达相应产物,以达到基因治疗的目的。

                    (3) 基因治疗步骤:治疗性基因的选择 基因载体的选择 重组体的构建 靶细胞的选择 基因转移 外源基因表达的筛选 回输体内 检测疗效

                    a.治疗性基因的选择:选择该单基因遗传病的野生型基因作为治疗性基因。

                    b.基因载体的选择:选用重组腺病毒相关病毒作为载体

                    c.靶细胞的选择:选择该患者的淋巴细胞作为靶细胞

                     

                       

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